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ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南

分類：操作指南
作者：
來源：
發(fā)布時(shí)間：2021-12-03
訪問量：0

【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。

ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南

【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。

分類：操作指南
作者：
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發(fā)布時(shí)間：2021-12-03
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詳情

【試驗(yàn)?zāi)康暮驮怼?/div>

ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。

對于成年個(gè)體被檢者，紅細(xì)胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應(yīng)關(guān)系。其獨(dú)特性質(zhì)在于：紅細(xì)胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應(yīng)的強(qiáng)反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，則可以預(yù)見血漿中存在抗A抗體。

常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗(yàn)證，只有正反定型結(jié)果一致時(shí)才能準(zhǔn)確定型。

Rh陽性和Rh陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細(xì)胞上是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。

ABO/RhD血型定型檢測試劑卡采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學(xué)的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗體特異性結(jié)合在一起，其中抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctl管中灌注了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細(xì)胞上A、B及D抗原檢測，而A細(xì)胞、B細(xì)胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)，凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；而抗原抗體沒有反應(yīng)時(shí)，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。

【ABO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】

1. 用于輸血前檢測

(1) 鑒定ABO血型，以備選擇ABO血型相配合的血液用于交叉配血。

(2) 鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。

2. 用于圍產(chǎn)期檢查

(1) 用于產(chǎn)前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)前預(yù)測。

(2) 用于產(chǎn)后母子的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)后診斷。

3. 用于常規(guī)ABO、RhD血型化驗(yàn)檢查，如健康體檢等。

【樣本要求】

1. 建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。

2. 血液樣本在采集后48小時(shí)以內(nèi)檢測。

【所需儀器設(shè)備及耗材】

1. ABO、RhD血型定型檢測試劑卡

2. 血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）

3. 微柱凝膠卡離心機(jī)

4. 微量移液槍及吸頭

【試驗(yàn)操作】

按照下列步驟進(jìn)行操作

一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

1. EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支12×75mm 試管中，余下的壓積紅細(xì)胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細(xì)胞）或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。

2. 另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細(xì)胞。

3. 在一支12×75mm試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細(xì)胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細(xì)胞懸液。

4. 將反定型A型、B型紅細(xì)胞用生理鹽水或LISS液配制成0.8~1%濃度。

二、ABO、RhD定型

1. 取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干涸。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜。

2. 用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ctl孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%濃度的被檢者紅細(xì)胞懸液。

3. 向A細(xì)胞孔中加入50μl 0.8~1%的A型紅細(xì)胞懸液。

4. 向B細(xì)胞孔中加入50μl 0.8~1%的B型紅細(xì)胞懸液。

5. 分別向A細(xì)胞、B細(xì)胞、Ctl孔中加入25μl 被檢者血漿。

6. 在臺面交替輕扣卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。

7. 將卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心，LB-3000低速離心機(jī)一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結(jié)果并記錄。

【結(jié)果判讀及解釋】

1. 反應(yīng)陰、陽性的判讀

【試驗(yàn)?zāi)康暮驮怼? ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。對于成年個(gè)體被檢者，紅細(xì)胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應(yīng)關(guān)系。其獨(dú)特性質(zhì)在于：紅細(xì)胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應(yīng)的強(qiáng)反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，則可以預(yù)見血漿中存在抗A抗體。常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗(yàn)證，只有正反定型結(jié)果一致時(shí)才能準(zhǔn)確定型。 Rh陽性和Rh陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細(xì)胞上是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。 ABO/RhD血型定型檢測試劑卡采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學(xué)的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗體特異性結(jié)合在一起，其中抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctl管中灌注了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細(xì)胞上A、B及D抗原檢測，而A細(xì)胞、B細(xì)胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)，凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；而抗原抗體沒有反應(yīng)時(shí)，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。 20121212104122758.jpg 【ABO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】 1.?用于輸血前檢測 (1) 鑒定ABO血型，以備選擇ABO血型相配合的血液用于交叉配血。 (2) 鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。 2.?用于圍產(chǎn)期檢查 (1)?用于產(chǎn)前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)前預(yù)測。 (2)?用于產(chǎn)后母子的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)后診斷。 3.?用于常規(guī)ABO、RhD血型化驗(yàn)檢查，如健康體檢等。【樣本要求】 1.?建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。 2.?血液樣本在采集后48小時(shí)以內(nèi)檢測。【所需儀器設(shè)備及耗材】 1.?ABO、RhD血型定型檢測試劑卡 2.?血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞） 3.?微柱凝膠卡離心機(jī) 4.?微量移液槍及吸頭【試驗(yàn)操作】? 按照下列步驟進(jìn)行操作一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細(xì)胞的準(zhǔn)備 1.?EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支12×75mm 試管中，余下的壓積紅細(xì)胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細(xì)胞）或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。 2.?另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細(xì)胞。 3.?在一支12×75mm試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細(xì)胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細(xì)胞懸液。 4.?將反定型A型、B型紅細(xì)胞用生理鹽水或LISS液配制成0.8~1%濃度。二、ABO、RhD定型 1.?取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干涸。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜。 2.?用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ctl孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%濃度的被檢者紅細(xì)胞懸液。 3.?向A細(xì)胞孔中加入50μl?0.8~1%的A型紅細(xì)胞懸液。 4.?向B細(xì)胞孔中加入50μl?0.8~1%的B型紅細(xì)胞懸液。 5.?分別向A細(xì)胞、B細(xì)胞、Ctl孔中加入25μl 被檢者血漿。 6.?在臺面交替輕扣卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。 7.?將卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心，LB-3000低速離心機(jī)第一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結(jié)果并記錄。【結(jié)果判讀及解釋】 1.?反應(yīng)陰、陽性的判讀 20121212104153407.jpg 【注意事項(xiàng)】 1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應(yīng)用。 2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。 3. 撕開凝膠卡封口膜時(shí)，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。 4. 樣本采集后應(yīng)盡快檢測，若試驗(yàn)需要延遲，應(yīng)將樣本置2~8℃下短期儲存。 5. 紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結(jié)果。 6. 溶血、脂血、細(xì)菌污染等情況的標(biāo)本會影響檢測結(jié)果。 7. 血漿或血清標(biāo)本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細(xì)胞在微柱凝膠中的沉降，出現(xiàn)假陽性。 8. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾處理。 9. 在Ctl孔（自身陰性對照）結(jié)果為陽性時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果無效。可能原因是由于被檢紅細(xì)胞已經(jīng)致敏IgM抗體導(dǎo)致自發(fā)凝集，此時(shí)可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細(xì)胞上的IgM抗體破壞后再行 ABO、RhD血型檢測。 10. 抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如DⅥ）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細(xì)胞反應(yīng)為陰性，則確定為RhD陰性。 11. 若出現(xiàn)＜2+的弱陽性反應(yīng)，須做進(jìn)一步試驗(yàn)才能準(zhǔn)確定型，即確認(rèn)弱反應(yīng)是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。 12. 若出現(xiàn)混合視野反應(yīng)，需要了解被檢者近期3個(gè)月內(nèi)是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。 13. 由于6月齡以下的嬰兒其血漿/血清中不似成人一樣存在可預(yù)見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型。【ABO正反定型不一致原因分析】如果血型定型正反定型結(jié)果不一致時(shí)，則不能準(zhǔn)確定型，需要分析產(chǎn)生不一致的原因。引起正反定型不一致的原因如下：（一）正定型出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原 1. A亞型、B亞型或AB亞型。 2. 白血病導(dǎo)致A或B抗原減弱。 3. 何杰金病（Hodgkin’s）有時(shí)會抑制抗原表達(dá)，與白血病類似。 4. 由于某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的血型物質(zhì)，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。需要將正定型的紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。 5. 骨髓移植。 6. 非ABO同型輸血。（二）正定型紅細(xì)胞上多余的抗原反應(yīng) 1. 自身凝集紅細(xì)胞、抗體致敏紅細(xì)胞導(dǎo)致。 2. 細(xì)胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應(yīng)。 3. 細(xì)胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導(dǎo)致。 4. 骨髓移植。 5. 獲得性B。 6. B（A）現(xiàn)象。? 7. ABO非相合輸注。? （三）正定型出現(xiàn)混合視野反應(yīng)? 1. 近期輸血。? 2. 骨髓移植。? 3. 異卵雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。? 4. 胎兒和母體出血。? （四）反定型血清中出現(xiàn)弱反應(yīng)或反應(yīng)缺失? 1. 年齡相關(guān)：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。? 2. ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。? 3. 低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。? 4. 移植患者使用抗排異藥物。? 5. 雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。? （五）反定型出現(xiàn)多余的抗體反應(yīng)? 1. 冷自身抗體。? 2. 特異性冷同種抗體A。? 3. 血清中存在針對試劑紅細(xì)胞保存液成分的抗體。? 4. 某些疾病導(dǎo)致球蛋白水平增高（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s　淋巴瘤）引起緡錢狀凝集。　 5. 輸用大分子血漿擴(kuò)容劑。? 6. 非ABO同型的移植。? 7. 靜脈注射免疫球蛋白。? （六）技術(shù)方面的錯(cuò)誤? 1. 血液樣本被污染，如混入其他人樣本。? 2. 被檢紅細(xì)胞的濃度過高或過低。? 3. 忘記在反應(yīng)體系中加入檢測樣本或試劑。? 4. 未按照試劑使用說明進(jìn)行試驗(yàn)。? 5. 離心步驟離心時(shí)間不足或離心時(shí)間超時(shí)。? 6. 對試驗(yàn)結(jié)果記錄或判讀不正確。

【注意事項(xiàng)】

1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應(yīng)用。

2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。

3. 撕開凝膠卡封口膜時(shí)，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。

4. 樣本采集后應(yīng)盡快檢測，若試驗(yàn)需要延遲，應(yīng)將樣本置2~8℃下短期儲存。

5. 紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結(jié)果。

6. 溶血、脂血、細(xì)菌污染等情況的標(biāo)本會影響檢測結(jié)果。

7. 血漿或血清標(biāo)本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細(xì)胞在微柱凝膠中的沉降，出現(xiàn)假陽性。

8. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾處理。

9. 在Ctl孔（自身陰性對照）結(jié)果為陽性時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果無效。可能原因是由于被檢紅細(xì)胞已經(jīng)致敏IgM抗體導(dǎo)致自發(fā)凝集，此時(shí)可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細(xì)胞上的IgM抗體破壞后再行 ABO、RhD血型檢測。

10. 抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如DⅥ）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細(xì)胞反應(yīng)為陰性，則確定為RhD陰性。

11. 若出現(xiàn)＜2+的弱陽性反應(yīng)，須做進(jìn)一步試驗(yàn)才能準(zhǔn)確定型，即確認(rèn)弱反應(yīng)是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。

12. 若出現(xiàn)混合視野反應(yīng)，需要了解被檢者近期3個(gè)月內(nèi)是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。

13. 由于6月齡以下的嬰兒其血漿/血清中不似成人一樣存在可預(yù)見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型。

【ABO正反定型不一致原因分析】

如果血型定型正反定型結(jié)果不一致時(shí)，則不能準(zhǔn)確定型，需要分析產(chǎn)生不一致的原因。引起正反定型不一致的原因如下：

（一）正定型出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原

1. A亞型、B亞型或AB亞型。

2. 白血病導(dǎo)致A或B抗原減弱。

3. 何杰金病（Hodgkin’s）有時(shí)會抑制抗原表達(dá)，與白血病類似。

4. 由于某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的血型物質(zhì)，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。需要將正定型的紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。

5. 骨髓移植。